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生化分析儀有哪些主要測定方法?

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生化分析儀有哪些主要測定方法?

發布日期:2019-02-14 作者: 點擊:

生化分析儀作為一種用于檢測、分析生命化學物質的儀器,在臨床上對疾病的診斷、治療和預后及健康狀態提供信息依據。因此現在很受人們的廣泛使用。那么醫療器械生化分析儀有哪些主要測定方法?

一、連續監測法

又稱速率法。即連續監測反應過程,根據所測定的產物生成或底物消耗的速度進行定量分析的方法。在反應時間進程曲線上為反應呈恒速區段(斜率保持不變),常用于酶活性線性反應期測定。

1、連續監測法即零級反應速率法,亦稱斜率法。在較長的反應時間區段內(至少90-120秒),每隔一定時間(常為2~30秒)讀取一次吸光度值,至少讀取4點,得到3個△A;一般將連續多次讀數作最小二乘法處理,讀數間隔時間太短的作帶速率時間(TR)多點法處理,均取線性反應部分的讀數,求出單位時間內的反應速率△A/min。此法必須以零級反應為測定計算的基礎,因為只有在零級反應下,單位時間內的吸光度變化(反應速率△A/min)才與酶活力呈正比。此法相對減少了分析誤差,大大提高了分析速度和準確性。但是,半自動生化分析儀采用單樣品連續監測,相當耗時。應用連續監測法,首先應準備線性范圍內的高、中、低濃度的樣品,分別作反應時間進程曲線,了解不同濃度下反應全過程,兼顧確定延遲時間和線性監測期。

2、兩點速率法即所謂擬一級速率法。在反應中選取兩時問點t1、t2,讀取吸光度A1、A2,計算(A2-A1),(t2-t1)=△A,△t。此方法與終點兩點法的區別主要有兩點:后一讀數點反應未達終點,以速率計算結果。它與連續監測法比較,缺點在于人為確定t1、t2,不定因素較多,不能保證反應在t 1-t 2期間呈線性,影響結果準確性;應在常規測定前,先做預試驗來確定線性時間段。若在選擇的時間段內反應不成線性(如零級反應期短,儀器無法設置或測定),則只能改用終點法。優點在于方法簡單;酶活力較低、測定吸光度值較小時,可增加測定時間段而不受儀器連續監測時間點的局限,減少讀數誤差。

3、速率B法在一個通道內一次進行兩項反應相關的速率法測定。它既可以是兩項試驗測定,也可用于干擾或/及樣品空白自動補償0后一用途的原理是:利用儀器的微機自動處理,在第1反應(干擾反應)一直維持線性的前提下,可以從第二反應(主反應)速率中扣除第1反應速率的延續影響。如用于消除膽紅素轉化為膽綠素吸光度下降、對肌酐苦味酸法測定的負干擾等。某些儀器(如HITACHI系列)設置此方法。

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二、終點法

根據反應達到平衡時反應產物的吸收光譜特征及其吸光度大小,對物質進行定量分析的方法。對一般化學反應來說,反應完全(或正、逆反應動態平衡)、反應產物穩定時為反應終點。對抗原一抗體反應來說,是抗原和抗體完全反應、形成最大且穩定的免疫復合物時為終點。在反應時間進程曲線上為與x軸平行線區段。在測定計算方式上,一般分為一點法和兩點法兩種。

1、一點法

以試劑和樣品混合之前的空氣空白(GB)、水空白(WB)或試劑空白(RB)的吸光度值為測定計算基點,以反應終點的吸光度讀數減去空白讀數,得到反應吸光度。通過與相同條件下校準液反應吸光度的比較,求得測定結果。常與一點校準法配合使用,即采用一個校準濃度,校準曲線通過零點且成線性。也應用多點校準。

2、兩點終點法

即終點一始點法 以試劑和樣品混合之后的某一時間點作為始點,以反應終點的吸光度讀數減去始點讀數。一定條件下可降低樣品對反應或反應本身的特異性于擾(主要指色度干擾)。常采用雙試劑,多以加R2前某一點作測定始點;某些情況下,也可以加R2后一點作測定始點。若使用單試劑,主反應啟動太快或儀器起始讀數點受限時難以運用。

固定時間法與兩點終點法的區別只是在:測定讀數的末點不在反應平衡區段,而是根據方法學選擇。如血清肌酐(苦味酸法)測定。

3.三點終點法

即雙終點法,在一個通道內一次進行兩項反應相關的終點法測定。比如同測游離脂肪酸和甘油三酯。某些儀器(如HITACHI系列)設置此方法。

三、空白校正

在分光光度法中,常利用空白溶液來調節儀器的吸光度零點,或用來抵消某些測定的干擾因素。在生化分析儀測定中,除了采用雙或多波長、兩點法等排除背景干擾外,常要運用專門空白測定,以便從樣品測定吸光度中扣除其影響。正確選擇空白校正,對提高準確度起重要作用。

1、試劑空白

一般在方法類型和校準模式中,即分為有或無試劑空白兩大類。試劑空白單獨測定或與校準配合測定,并需預選裝載去離子水樣品杯或試劑空白架。校準或病人樣品的各測定點吸光度,均要扣除相應測定點的試劑空白吸光度或空白速率值。無試劑空白的方法,多直接以反應杯的水空白作為測定基準值。

在不少儀器中,試劑空白測定類似校準測定,并非在病人樣品測定時實時測定。所以,要注意它的測定頻率,避免因試劑批號或質量的變化造成試劑空白的改變引起的計算誤差。

2、樣品空白

主要為了消除樣品本身混濁或色度的干擾。常采用空白通道法,測定校正結果=顯色反應通道結果-空白通道結果。多數儀器須另外占用測定通道,分析速度減半,但去干擾的準確性應高于兩點終點

通過以上內容的整理總結,大家是否對醫療器械生化分析儀的主要測定方法更為了解了呢,如果你現在有購買或批發醫療器械的需要,歡迎隨時與我們聯系吧。

相關標簽:醫療器械,制劑出口業務

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